雙熒光素酶報告基因檢測實驗服務

雙熒光素酶報告基因檢測實驗服務是一種廣泛應用于分子生物學研究的專業(yè)技術(shù)服務，主要用于基因表達調(diào)控、miRNA靶基因驗證、啟動子活性分析等領(lǐng)域
。以下是該服務的核心內(nèi)容和技術(shù)要點：

一、服務內(nèi)容

1. ?miRNA靶基因驗證?

• 將預測的mRNA/lncRNA靶序列插入報告基因載體，通過熒光素酶活性變化驗證miRNA的靶向作用

• 常用載體：psiCHECK2（R-Luc 3'UTR插入靶序列，F(xiàn)-Luc作內(nèi)參）

2. ?啟動子活性分析?

• 通過截短或突變啟動子區(qū)域（通常2kb片段），檢測熒光素酶活性變化以確定功能區(qū)域

• 常用載體：pGL3-Basic（F-Luc上游插入啟動子）

3. ?轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控驗證?

• 共轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)錄因子表達載體與啟動子報告載體，通過活性變化分析調(diào)控關(guān)系

4. ?ceRNA機制研究?

• 驗證lncRNA/circRNA通過競爭miRNA調(diào)控靶基因的表達

二、實驗流程

1. ?載體構(gòu)建?：將目標序列（如啟動子、UTR等）克隆至報告載體

2. ?細胞轉(zhuǎn)染?：使用高效轉(zhuǎn)染試劑（如LipoFiter）或病毒系統(tǒng)

3. ?雙熒光檢測?：

• 裂解細胞后，依次加入LARII（測F-Luc活性）和STOP&GLO Reagent（測R-Luc活性）

4. ?數(shù)據(jù)分析?：以F-Luc/R-Luc比值校正轉(zhuǎn)染效率，計算相對活性

三、服務優(yōu)勢

• ?專業(yè)預測支持?：部分提供商免費提供實驗前的結(jié)合位點預測服務

• ?定制化方案?：可針對不同樣本定制質(zhì)粒或miRNA mimics

• ?高靈敏度檢測?：采用均質(zhì)法輝光型試劑盒（如Promega），減少操作誤差

四、應用案例

• ?案例1?：驗證某miRNA抑制靶基因表達，熒光素酶活性下降50%以上

• ?案例2?：發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子X通過結(jié)合啟動子Y的-500bp區(qū)域增強表達

五、注意事項

• 實驗需設(shè)置背景對照、陰性對照及陽性對照

• 推薦使用底部透明的96孔板以避免轉(zhuǎn)板誤差