大鼠ET-1檢測實(shí)驗(yàn)服務(wù)

大鼠ET-1檢測實(shí)驗(yàn)服務(wù)的原理：

用純化的大鼠內(nèi)皮素1(ET-1)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入內(nèi)皮素1(ET-1)再與HRP標(biāo)記的ET-1抗體結(jié)合，形成抗體抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠皮素1(ET-1)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠內(nèi)皮素1(ET-1)濃度。

大鼠ET-1檢測實(shí)驗(yàn)服務(wù)的樣本處理要求：

 1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)1分)。仔細(xì)收集上青，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20 分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)1分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3.尿液:用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)1分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集.上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS (PH7.2-7.4) 稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)1分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后，稱取重量。加入- -定量的PBS, PH7.4. 用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8"C的溫度。加入一定量的PBS (PH7.4)， 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于20C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP) 活性。