成年小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞原代培養(yǎng)

1. C57小鼠，8-10周，通過頸椎脫位處死，浸入75%乙醇浸泡5分鐘，轉(zhuǎn)移到通風(fēng)柜中的解剖盤中。

2. 使用眼科剪和鑷子，使髖關(guān)節(jié)脫臼，保持股骨頭完整。

3. 用止血鉗去除每個(gè)股骨頭的軟骨帽，將組織放入含2%雙抗的PBS中。

4. 用冰冷的含2%雙抗的PBS清洗2-3遍，將關(guān)節(jié)軟骨小心移到2ml離心管中。

5. 用眼科剪刀將軟骨帽剪成約1mm3的碎片，加入3ml預(yù)熱的Collagenase D（1.5mg/ml）。

6. 放入37℃、80rpm的搖床中進(jìn)行第一次消化，時(shí)間2h 。

7. 第一次消化結(jié)束后，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化，40um的細(xì)胞篩過濾后，離心1500rpm，2min。

8. 沉淀用DMEM培養(yǎng)基重懸，計(jì)數(shù)，種植在24孔板中。

9. 在未消化的組織中加入3ml預(yù)熱的Collagenase D，放入37℃、80rpm的搖床中進(jìn)行第二次消化，時(shí)間2h，然后收集細(xì)胞。